液相色譜是近年來發(fā)展起來的一種高靈敏度、高選擇性的快速分離分析技術(shù)。它不僅可用于痕量組分的分析和測定,還可用于大量的制備和分離。它的應(yīng)用范圍已經(jīng)超過了其他分離方法,特別是在中藥樣品的分析和分離方面。為該領(lǐng)域的進(jìn)步和發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。
液相色譜一般被認(rèn)為與大容量色譜柱和高流速有關(guān)。但是液相色譜的制備不是由設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動相的量決定的,而是由分離的目的決定的。液相分析的目的是量化和表征一種成分。制備液相的目的是提取和純化產(chǎn)品的單體。與傳統(tǒng)的純化方法(如蒸餾和萃取)相比,液相的制備是一種更有效的分離方法,因此被廣泛應(yīng)用于樣品和產(chǎn)品的萃取和純化。隨著合成、生物化學(xué)、制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M分需求的增加。液相色譜的應(yīng)用領(lǐng)域正在迅速擴(kuò)大。
液相色譜儀采用美國先進(jìn)技術(shù),提供快速高效的大規(guī)模分離系統(tǒng),由并聯(lián)泵、具有先進(jìn)電子電路的紫外-可見檢測器、1200 /mm凹面光柵光路系統(tǒng)、全反向控制工作站等組成。主要用于小型實(shí)驗(yàn)室,天然產(chǎn)物分離,蛋白質(zhì)的純化和鑒定,有機(jī)合成產(chǎn)物的分離和純化,精細(xì)化學(xué)品的分析,新藥和新化合物的篩選,HPLC樣品預(yù)處理。
液相色譜儀的注意事項(xiàng):
1.流動相過濾后要用超聲波脫氣,使用前要放回室溫。
2.不能用純乙腈做流動相,會卡住止回閥,導(dǎo)致泵不進(jìn)液。
3.使用緩沖溶液時(shí),樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱一小時(shí),然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,樣品完成后,必須用去離子水沖洗20mL以上。
4.如果長時(shí)間不使用儀器,應(yīng)取出色譜柱,用塞子密封保存。注意,你應(yīng)該使用有機(jī)相而不是純水(例如,甲醇等。),因?yàn)榧儍羲菀装l(fā)霉。
5.每個(gè)樣品完成后,應(yīng)使用溶解樣品的溶劑清潔進(jìn)樣器。
6.C18柱不能進(jìn)入蛋白質(zhì)樣品、血液樣品和生物樣品。
7.若因堵塞導(dǎo)致壓力過高,則按照預(yù)柱混合器中的過濾器管道過濾器止回閥進(jìn)行檢查和清洗。清潔方法:
以異丙醇為溶劑洗滌;
(2)放入異丙醇中,用超聲波清洗;
用10%稀硝酸清洗;
8.氣泡會造成壓力不穩(wěn)定,重現(xiàn)性差,使用時(shí)盡量避免氣泡。9.如果進(jìn)液管內(nèi)沒有液體,用注射器吸出液體:通常情況下,輸液前要清洗流動相。
10.注意色譜柱的pH值范圍,不要進(jìn)樣強(qiáng)酸強(qiáng)堿樣品,尤其是堿性樣品。
11.更換流動相時(shí),應(yīng)先將吸濾頭放入燒杯中,邊振邊洗,再插入新的流動相。更換不混溶的流動相時(shí),應(yīng)使用異丙醇進(jìn)行過渡。
以上知識僅供參考,希望對你有幫助!
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